Herpes

Diagnoza herpesa, katere teste je treba opraviti?

Okužba z genitalnim herpesom (HSV, HSV) je razširjena po vsem svetu, epidemiološke študije pa kažejo povišanje števila okužb povsod. Genitalni herpes je eden od vzrokov za ulcerozne lezije genitalij. Okužbo s herpesom povzročajo tipi HSV 1 ali HSV-2, večina primerov genitalnega herpesa pa je povezana s HSV-2, vendar se upošteva tudi okužba in HSV-1, klinična slika prve epizode genitalnega herpesa pri bolnikih z okužbami s HSV-1 in HSV-2 je podobna. in resnost relapsa je manjša pri HSV-1 kot pri HSV-2. Poleg tega je resnost prve epizode in reaktivacija z okužbo s HSV-2 nižja pri bolnikih s predhodnim HSV-1. Opozoriti je treba, da je večina herpesnih okužb asimptomatska ali nediagnosticirana. Herpetična okužba se lahko zdi atipična, kar otežuje postavitev diagnoze. Večina primerov prenosa virusa na partnerja ali matere na novorojenčka se pojavi v odsotnosti kliničnih simptomov. Opravljene so bile študije, ki so pokazale, da HSV povečuje tveganje za okužbo s HIV. Protivirusno zdravljenje zmanjšuje klinične manifestacije HSV, kar bistveno zmanjšuje tveganje za prenos.

Je pomembno

Diagnosticiranje herpesa je pomembno za določanje taktike upravljanja, vendar herpes testi niso vključeni v presejalne študije..

Obstaja veliko načinov za odkrivanje HSV, klinično diagnozo genitalnega herpesa pa je treba vedno podpreti z laboratorijskimi testi, vključno s serotipizacijo, saj serotip vpliva tako na prognozo kot na režim zdravljenja.. Končna diagnoza genitalnega herpesa je določena na podlagi vizualizacije določenih znakov na področju genitalij, z sproščanjem virusa ali z detekcijo antigena.. V nekaterih laboratorijih odkrivanje DNA HSV z molekularnimi diagnostičnimi metodami nadomešča izolacijo virusne kulture in ELISA diagnostiko. Serološki testi se izvajajo pri bolnikih s simptomi okužbe s herpesom, kadar neposredne metode kažejo negativne rezultate, če simptomi niso prisotni in ugotovijo preteklo ali sedanjo okužbo.. 

Naslednji vidiki vplivajo na rezultate laboratorijske diagnoze HSV:

  • vrsta preskusa;
  • kakovost vzorca,
  • laboratorijske zmogljivosti;
  • razlaga rezultatov.

Neposredne metode

Vzorci, pridobljeni iz vezikularnih lezij v prvih 72 urah njihovega nastanka, imajo veliko diagnostično vrednost. Drugi biomateriali iz prejšnje lezije ali študija brisov genitalij se izvajajo, če obstaja visoko tveganje za HSV. Če se na ozadju zdravljenja pojavijo skorje, se verjetnost zaznavanja HSV znatno zmanjša. Uporaba agresivnih sredstev za dezinfekcijo lezij lahko inaktivira virus. Zdravljenje s kalcijevim alginatom je škodljivo za HSV in se zato ne uporablja..

Je pomembno

Neposredni testi potrjujejo prisotnost HSV v sumljivem fokusu ali v izločkih genitalij. V idealnem primeru se analizira vzorec iz vezikla, ki se je pojavil pred manj kot 24 urami..

Če je veliko mehurčkov, posesajte vsebino več. Glede na študije je občutljivost analize pri bolnikih s ponavljajočimi se lezijami nižja kot pri bolnikih s prvimi epizodami.

V nekaterih primerih lahko elektronska mikroskopija tekočega biomateriala daje pozitiven rezultat. Ta postopek, čeprav hiter, je relativno neobčutljiv, pozitivni rezultati pa se pojavijo le pri zunanjih poškodbah (izpuščaj na zadnjici ali stegnih, manj na sluznicah). Priporočljivo je, da analizno tekočino vzamemo iz celotne vezikule z uporabo tuberkulinske brizge, medtem ko je zadostna aspiracija vsebine..

Kapljico posušimo na zraku in jo pregledamo z mikroskopom..

Nekateri laboratoriji uporabljajo molekularne metode za odkrivanje in tipizacijo HSV. Vzorci, vzeti za izolacijo ali detekcijo antigena, so primerni tudi za metode odkrivanja DNA. Povečana občutljivost PCR diagnostike, ki temelji na pomnoževanju nukleinskih kislin v primerjavi z drugimi neposrednimi metodami (odkrivanje kulture ali antigena), omogoča analizo materiala z minimalnim številom patogenih delcev..

Standardna virusna kultura

Setev na hranilnem mediju je zlati standard za odkrivanje HSV, specifičnost je 100% za HSV-1 in HSV-2, občutljivost je odvisna od stopnje herpesne okužbe in časa prejema vzorca..

Občutljivost se giblje od 75% za prve epizode do 50% za recidive..

RIF v herpesu

Z detekcijo antigena HSV z barvanjem z brisom DFA (fluorescenca) lahko hitro določimo celično kulturo. Pomembno je, da se za to analizo dobi visokokakovosten vzorec; v tem načinu lahko občutljivost testa doseže 90%, zlasti med začetno okužbo.

Material se obarva s posebno fluorescentno snovjo, čemur sledi mikroskopija.

Odkrivanje virusnega antigena je alternativa diagnostični metodi kulture, metoda, ki lahko pomaga, če se lahko morebitni prisotni virus inaktivirajo, če se nepravilno obdelujejo in prenašajo vzorci.. 

Za potrditev HSV je občutljivost testa podobna ali višja kot pri metodah kulture..

Detekcija antigenov HSV je možna z uporabo testov DFA ali imunoperoksidaznih testov na fiksnih in obdelanih vzorcih celic.. 

Dzank bris

Herpetična okužba povzroča tipične citopatske spremembe v genitalnih epitelijskih celicah). Povečujejo se po velikosti, pojavijo se intranuklearne vključitve in pogosto se vizualizirajo multinuklearne celice. Po posebnem barvanju se vzorci pregledajo s svetlobnim mikroskopom..

Slabosti: ta metoda ima nizko občutljivost in ne razlikuje med HSV-1 in HSV-2. Poleg tega je podobna slika lahko na primer z noricami.

Za potrditev diagnoze so potrebni bolj občutljivi testi..

Elektronska mikroskopija

Neposredna študija vezikularne tekočine ali drugega kliničnega materiala z uporabo elektronske mikroskopije za diagnozo HSV je omejena z dejstvom, da morfologija virusa prav tako ne omogoča razlikovanja HSV od drugih virusov herpesa (npr. Virus varicella-zoster). Ta tradicionalna metoda je bila v veliki meri nadomeščena s fluorescentnim barvanjem z razmazom, ki je zagotovilo posebno vrsto diferenciacije za HSV-1 in HSV-2.

Odkrivanje DNK virusa

Virusno DNA lahko odkrijemo s hibridizacijskimi metodami z uporabo radioaktivno označenih ali biotiniliranih vzorcev. Te metode so večinoma nadomeščene z bolj občutljivimi in manj časovno zahtevnimi študijami, ki uporabljajo pomnoževanje ciljne HSV DNA z uporabo polimerazne verižne reakcije (PCR). Specifičnost postopka pomnoževanja je zagotovljena bodisi z izvajanjem ponavljajoče se PCR diagnostike s ciljno specifičnimi primerji ali z uporabo HSV specifične hibridizacije z amplificiranimi produkti..

V primeru možnega genitalnega herpesa PCR zazna virusno DNA v nekaj dneh po tem, ko lezija ne vsebuje dokaznega infekcijskega virusa. To pomeni, da lahko diagnostična metoda, ki temelji na ojačanju nukleinske kisline, povzroči pozitiven rezultat, tudi če se pojavi simptomatsko okrevanje in zdravljenje ni več potrebno..

Negativne rezultate sejanja običajno potrdijo z diagnosticiranjem PCR. Občutljivost PCR je višja od standardne kulture. Pojav PCR v realnem času je zmanjšal tveganje lažno pozitivnih rezultatov.. 

Posredne serološke analize

Približno 8-10 ml krvi se zbere v epruveti brez antikoagulanta ali konzervansov. Ko se koagulira pri sobni temperaturi, se serum centrifugira in postavi v drugo epruveto. Če je skladiščenje potrebno več tednov, se serum ohladi pri 4 ° C ali zamrzne pri temperaturi pod -20 ° C. Zaradi hemolize ni priporočljivo zamrzniti polne krvi, zaradi česar je vzorec neprimeren za serološko testiranje..

Analiza za odkrivanje protiteles proti HSV je predpisana, kadar drugih viroloških študij ni mogoče izvesti ali dati negativne rezultate. To še posebej velja za asimptomatsko okužbo..  

Serološke preiskave za HSV se lahko uporabijo v naslednjih primerih:

  • študija prenosa okužbe s herpesom na partnerja;
  • prva epizoda okužbe, zlasti pri nosečnicah;
  • ponavljajoči se HSV;
  • anketa med različnimi parovi,
  • načrtovanje nosečnosti (moški je pozitiven, ženska negativna);
  • Obremenjena porodnična in ginekološka anamneza s sumom na herpesno okužbo;
  • presejanje za SPO;
  • pri bolnikih, okuženih s HIV, za odkrivanje HSV-2.

Čeprav številni serološki testi odkrivajo protitelesa proti HSV, ni mogoče določiti posebne vrste (1 ali 2)..

Med HSV-1 in HSV-2 obstaja tesna serološka povezava, od katerih vsaka kodira serološko različen glikoprotein G (gG-1 in gG-2). Ta razlika je bila uporabljena pri razvoju seroloških testov, značilnih za določeno vrsto.. 

ELISA, imunobloting

Imunobloting (WB) je standard za odkrivanje protiteles proti HSV. Preskusi imajo visoko občutljivost in sposobnost razlikovanja protiteles proti HSV-1 in HSV-2. Reakcija se pojavi s sproščanjem fiksnih beljakovinskih matric ("blots") iz lizatov celic HSV-1 ali HSV-2.

Največja diagnostična vrednost je definicija protiteles IgM, ki se pojavijo približno 2 tedna po okužbi, ali pa so prisotni v krvi med kronično okužbo ali njeno aktivacijo..

IgG je določen z dolgoročnim obstojem okužbe v telesu ali ko je aktiviran.

Je pomembno

Metoda ELISA je lahko kvantitativna (določanje titra protiteles, višji, ostrejši proces) in kvalitativna (prisotnost virusa, tipa, protiteles, prejšnjih recidivov)..

Z odkrivanjem protiteles proti virusom predanimnih beljakovin lahko ocenimo trajanje procesa.

Dešifriranje analize ELISA za herpes: \ t

  • IgM "-", IgG do "+" predhodnih beljakovin, IgG pozno "+" / primarna akutna okužba ali \ t.
  • IgM "-", IgG do prezgodnjih beljakovin "-", IgG pozno "+" / imajo imunski odziv na virus herpesa (nosilec).
  • IgM "+", IgG do "+" predhodnih beljakovin, pozni IgG "-" / primarna akutna okužba.
  • IgM "+", IgG do "+" predhodnih beljakovin, IgG pozne "+" / primarne akutne okužbe.
  • IgM "-", IgG do prezgodnjih beljakovin "-", IgG pozno "-" / norma, kar kaže na odsotnost patološkega procesa.

Testiranje odpornosti

Obstaja veliko protivirusnih zdravil za zdravljenje okužb s HSV; večino od njih dajemo aciklovirju. Odpornost HSV na aciklovir narašča in skoraj vsi klinično pomembni sevi, odporni na aciklovir, so diagnosticirani pri bolnikih z oslabljenim imunskim sistemom, zlasti pri tistih, ki so okuženi s HIV. Razvoj odpornosti se ponavadi pojavi kot posledica mutacij v virusnem genomu, prisotnost selektivnega učinka zdravila pa povzroči stabilno populacijo virusov. Izolacija HSV od trajnih lezij je kljub ustreznim odmerkom sumljiva na odpornost na Aciklovir.

Katere bolezni se uporabljajo za diferencialno diagnozo herpesa?

Diferencialna diagnoza se izvaja z naslednjimi patologijami:

  • Bechtechov sindrom (neinfekcijski vaskulitis, za katerega so značilne orogenitalne aftozne razjede, poškodbe kože in oči ter vpletenost CNS, prebavil in sklepov);
  • kandidoza;
  • mehki šankr;
  • Coxsackie virus;
  • herpes zoster;
  • sifilis;
  • Crohnova bolezen;
  • nekaj dermatoze;
  • dimeljski granulom itd..

Mishina Victoria, urolog, zdravnik